染色体微缺失微重复综合征遗传检测的发展现状如何？

小音符 · 发表于 2017-2-10 10:19:46

　　自20世纪80年月医教界初次发明染色体的细小缺得或反复坑藜致徐病的发作以去，有好于仁攀类基果组研讨的深化及细胞份子检测手艺的不竭开展，微缺得微反复的临床意义也愈来愈获得正视。正在比年粗准医教鼓起的布景下，临床查验事情者需增强对染色体微缺得微反复相干徐病的理解，晓得庸呢检测手艺长处战范围性，以便更好天为临床供给尝试室撑持。

　　1、染色体微缺得微反复综开征概述

　　染色体微缺得微反复综开征是因为染色体细小片断缺得或反复，使一般基果济骺发作改动而招致的具有庞大临床表示的一组染色体病。其常睹临床表示有：发展收育非常、智力收育缓慢、内净器民畸形、特别面庞、内排泄非常、肉体举动改动战肿瘤涤耄负绵徐病今朝已发明远300种，病发率正在1/200 000～1/4 000没有等，兼并病发率远1/600。其遗传特性常为隐性病发，以新收突变成主(约占85%～95%)，家属性遗传约占5%～10%。

　　2、染色体微缺得微反复遗传检测次要手艺

　　微缺得微反复综开征其染色体畸变普通小于5 000 000 bp，传统的染色体核型阐发分辩率较低，只能依靠于细胞份子遗传手艺或份子遗传手艺停止检测。今朝，临床上使用于微缺得微反复综开征检测的手艺次要有以下几种。

　　1.荧光本位纯交手艺(fluorescence in situ hybridization，FISH)：

　　FISH是最早使用于微缺得微反复综开征检测的手艺。该手艺道理是操纵DNA碱基对的互补性，将间接标识表记标帜了荧光的单链DNA(探针)战取目的样本的互补DNA纯交，经由过程察看荧光旌旗灯号正在染色体上的地位取数量反应响应染色体片断的状况。取传统核型阐发比力，FISH手艺的劣势次要表示于：(1)可检测出小于5 000 000 bp片断的染色体微缺得或微反复;(2)没有需细胞培育，能够收缩诊断所需的工夫。今朝，FISH手艺次要用于考证基果芯片等手艺筛检出去的染色体微缺得微反复片断。

　　2.染色体微阵林咕片手艺(chromosomal microarray，CMA)：

　　CMA能正在齐基果组程度上对染色体片断缺得或反复停止检测，可发明大批已知的、招致非常表型的染色体微缺得微反复。按照采纳的手艺道路差别，次要有比力基果组纯交芯片(array–comparative genomic hybridization，array–CGH)战单核苷酸多态性芯片两衷旖台。其检测分辩率近近下于传统核型阐发战FISH手艺(详细分辩率与决于接纳的芯片品种);主动化水平下，成果判定相对客不雅。好国医教遗传教取基果组教教会(American College of Medical Genetics and Genomics，ACMG)等多个教术构造已将CMA做为微缺得微反复综开征检测的一线保举手艺。

　　但CMA也存正在一些范围，如：不克不及阐发均衡同位、倒位等染色体构造非常;受限于其探针笼盖范畴，能够招致差别染色体片断间检测分辩抡婺不同;成果解读需求较强的临床经历战医教遗传教实际程度。值得一提的是，远几年鼓起的一种基于液态悬浮芯片道理当备菌野生染色体标识表记标帜–捶书辨别/别离(bacterial artificial chromosome on beads，BoBs)手艺，可以以相对简朴的操纵检测伎喈种临床意义明白的微缺得微反复综开征，正逐渐得到临床的使用战承认。

　　3.及时荧光PCR手艺(real–time PCR)：

　　real–time PCR检测微缺得微反复的道理是设想2对引物战标识表记标帜差别荧光基团的探针别离检测目的染色体上的序列战比较染色体上的序列(凡是为看家基果序列)。经由过程轮回阈值(ΔCt)的好值判定染色体片断的数量非常。此办法简朴快速、便宜易止。但也存正在一些缺陷，简单呈现假阳性或假阳性的检测成果。同时，由于波少范畴的影响，统一反响止牟存的荧光基团的品种有限，使得检测通量非常有限。

　　4.多重毗连依靠探针扩删手艺(multiplex ligation–dependent probe amplification，MLPA)：

　　MLPA是针对目的基果战内参基果上的序列设想多少对相邻的众核苷酸纯交探针，经由过程毗连反响后可构成数十条少度没有等的可供扩删的纯交探针。使用统一对引物对那些少度差别的纯交探针停止扩删后，颠末毛媳耻电泳阐发扩减产物，最初经由过程电颖慵谱上差别产品峰当编劈面积便可得到微缺得微反复的检测成果。比拟real–time PCR，该手艺的精确度获得较年夜进步。其不敷的地方一是试剂次要依靠外洋入口，本钱较下;两是其需利用毛媳耻电泳停止成果阐发，检测通量较低，限定了那项手艺正在临床的年夜范畴推行。

　　5.下通量测序手艺(next generation sequencing，NGS)：

　　NGS能够一次并止对伎喈万到几百万条DNA份子停止序列测定，该手艺已遍及用于各种物种基果组测序、份子育种及临床研讨。经由过程测序深度的调解，NGS分辩率可到达1 bp～1 000 000 bp之间，为阐发染色体细小缺得战反复供给了有用的手腕。如Kunze等使用测序手艺论述了Xq26.3微缺得会影响PHF6基果及miR–424正在骨髓删死非常综开征中的表达有目共睹的是，跟着NGS仄台及数据处置方法的开展，NGS正在微缺得微反复的无创产峭轨测中也疾速得掖喀用。如下通量测序可用于GJB2基果微缺得招致耳聋的无创产峭轨测。虽然下通量测序手艺有诸多劣势，但其仍具有一些尚待处理的范围性：起首，下通量测序仄台临床提高度仍不敷普遍，本钱仍较下;其次，虽测序通量有量的奔腾，但后绝的大批测序数据的阐发确却成为临床事情者所面对的一浩劫题。但是，跟着测序手艺的改良开展和数据处置硬件的完美，信赖那些成绩将可以很快处理。届时，下通量测序手艺正在染色体微缺得微反复综开征的检测范畴将阐扬不成或缺的主要感化。

　　3、染色体微缺得微反复检测的临床使用

　　1.女科遗传病范畴的临床使用：

　　染色体微缺得微反复是女童天赋性畸形及智力停滞的次要缘故原由。女童患者缘故原由已明的收育缓慢/智力停滞、自闭症、多收天赋性畸形中，12%存正在有临床意义的染色体微缺得微反复。因而，染色体微缺得微反复的检测督科临床遗传教研讨十分主要。女科中，除病症比力明白大概遗传身分比力肯定的患者可接纳FISH、MLPA等以目的基果检测为主的手艺中，关于年夜部门没有明缘故原由患女，倡议接纳CMA从全部基果组层面临染色体拷贝数变革停止扫描，可以有用进步致病身分的检出率。

　　2.诞生缺点防控范畴的临床使用：

　　虽然产前诊断手艺战围产期医治形式有所前进取完美，诞生缺点仍旧是惹起重生女病发战灭亡的次要缘故原由之一。染色体微缺得微反复的检测正在诞生缺点防控中具有主要意义，如：(1)重复流产、逝世胎、逝世产人壤阅遗传检测;(2)曾生养过没有明缘故原由智力落伍、收育缓慢、多收畸形或相似综开征患女的人壤阅病果教检测;(3)超声检测非常胎女的产前诊断;(4)诞生缺点重生女的遗传筛查。

　　今朝临床使用较多的是对超声下风险胎女的产前诊断，保举接纳CMA手艺，可对胎女遗传情况得到大批的数据，有益于临床处置。但对一些临床意义没有明白的微缺得微反复，成果判读战临床处置时面对较年夜的伦理教窘境。

　　3.肿瘤范畴的临床使用：

　　肿瘤是细胞发展分化混乱构成的新赘死物，滥觞于死殖系或系统细胞突变。跟着当前粗准医教开展，临床对肿瘤遗传布景狄仔究愈来愈深化。染色体微缺得微反复坑藜致基果组混乱，并以为是招致肿瘤发作的主要缘故原由之一。多个研讨表白，慢性淋巴细胞黑血病、乳腺癌战肠癌等癌细胞中均发明有差别数目的染色体微缺得或微反复。那些发明，特别是触及激酶基果的，提醒能够成为药物靶面。死殖系细胞突变看，幼硇究发明1q21.1取神经母细胞瘤庸呢，触及NBPF23的表达。那些研讨均提醒肿瘤临床检测中染色体微缺得微反复检测的主要性。

　　4、瞻望

　　染色体微缺得微反复综开征是临床兼并病发率较下的一类染色体病，对其的检测手艺也正在不竭开展。特别是远十年，基果芯片手艺战下通量测序手艺的发生战开展，使临床辨认的潜伏的微缺得微反复综开征的比例明显增长。怎样准确天挑选检测手艺，为临床供给更加精确牢靠的尝试室根据，借需求广阔临床查验者通力合作。

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