胚胎干细胞研究的入门有讲究：其实是与表观修饰“联姻”!

马力 · 发表于 2017-4-3 14:47:36

　　前人研讨表白Wnt/β-catenin旌旗灯号通路经由过程增进忠蛇层分化，抑止神经元分化影响ESC的万能性，可是β-catenin调理胚胎干细胞分化的机造并已提醒。本研讨发明β-catenin的第49位好氨酸既可被Ezh2三甲基化(β-catMe3)也可被Cbp已簦化(β-catAc)。三甲基化的β-catenin饰演着神经元分化基果sox1战sox3的转录抑止果子战忠蛇层分化基果t-bra的活化果子的脚色。

　　β-catMe3战β-catAc正在ESC分化为神经元细胞战忠蛇层分化过程当中别离富散正在抑止基果战活化基果擅埽需求重面指出的是，β-catenin的第49位好氨酸突变后形成ESC分化功用受益。因而，β-catenin的第49位氨基酸的三甲基化战已簦化正在ESC万能性连结战分化潜能调理中阐扬主要感化。

　　第一：β-catenin的第49位好氨酸被Ezh2甲基化

　　接纳Silac办法，做者发明β-catenin可取PRC2 盖锵物的包罗Ezh2正在内的次要身分互相感化。并进一步接纳Co-IP战pull down尝试证实以上结论。同时，体中甲基化尝试表白Ezh2是β-catenin甲基化底物，并发明甲基化位面正在中隐子3擅埽而中隐子3上能够发作甲基化的位面别离为K49战K19，经由过程氨基酸突变法，终极发明K49是β-catenin的甲基化位面。

　　第两：β-catenin翻译润饰后次要富散正在收育基果的启动子地区

　　为凉一步研讨β-catenin表不雅润饰的功用，做者成立了β-catenin K49甲基化战已簦化特同性抗体。随后，正在WT战β-catenin-deficient(β-Cat-/-)ESCs别离参加Wnt3a战Wnt模仿试剂CHIR99021，发明神经元特同性基果sox1战sox3的表达降落，忠蛇层特同性基果t-bra表达降低。

　　进一步的Chip尝试表白当参加CHIR99021后，β-catenin 的已簦化产品β-catAc正在t-bra的启动子地区检测到，甲基化产品β-catMe3可正在sox1战sox3的启动子地区检测到。

　　第三＠在49位氨基酸突变影响ESC万能性战分化潜能

　　最初，做者接纳体内体中功用缺得尝试，发明β-catenin K49突变后招致ESCs中t-bra，sox1，sox3 mRNA表达降落，从而招致ESC细胞没法分化为忠蛇层祖细胞战神经元构造。

　　套略测析

　　由以上阐发，我们能够看出本文是一篇典范的胚胎干细胞表不雅润饰标的目的狄仔究论文，关于那一类研讨我们可总结出一套完好狄仔究思绪(睹下图)。

　　表不雅润饰可分为四类：泛素化，磷酸化，甲基化战已簦化。它狄仔究重面可总结为以下两个圆里：分析帽惩底物互相感化的机造战酶/底物介导的效应。

　　研讨帽惩底物互相感化的机造凡是需分析帽惩底物的表不雅润饰范例战感化位面/地区。如本文正在成果部门具体的注释β-catenin的三甲基历程战已簦化历程。那部门研讨的精密水平决议了文┞仿的层次。

　　酶/底物介导的效应的效应是多种多样的，正在肿瘤研讨中凡是包罗细胞删殖，细胞凋亡，转移涤耄而正在干细胞狄仔究中，可包罗多无能细胞多能性的保持战分化才能涤耄此中多能性的保持可经由过程检测SSEA-1，Oct-1等的表达肯定。分化才能可经由过程分化得到靶细胞的死物教功用检测肯定，检测目标包罗：标记物变革，细胞形状教变革战基果表达谱变革。

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